يُشار إلى اختبار تكوين النسائل أيضًا باسم «تكوين المستعمرات»، [1] وهو إجراء يُجرى في المختبر أو تحليل للبقاء بهدف تحديد قدرة خلية واحدة على تكوين مستعمرة محددة [2].
تشير مستعمرة A إلى خمسين خلية أو أكثر. وتفيد هذه العملية خصوصًا في تحليل آثار التأين والعوامل السامة للخلايا في فناء التكاثر الخلوي داخل أوساط الزرع. ويبدو أن جزءًا فقط من الخلايا المزروعة قادر على تكوين المستعمرات.[3]
A اختبار تكوين المستعمرات، المعروف أيضًا باسم اختبار الاستنساخ الخلوي، هو تقنية تُستخدم لدراسة قدرة خلية واحدة على النمو لتشكيل مستعمرة. يقيّم الاختبار قدرة الخلايا على التكاثر والاحتفاظ بهذه القدرة بعد تعرضها لعوامل خارجية مثل الإشعاع أو الأدوية. وهو اختبار أساسي في علم الأحياء الخلوي وعلم الأورام وعلم الأحياء الإشعاعي.
عند إجراء اختبار تكوين المستعمرات باستخدام الخلايا المعلّقة، توجد تحديات واعتبارات محددة ينبغي وضعها في الحسبان:
اختبار تكوين المستعمرات باستخدام الخلايا المعلّقة:
- الالتصاق بالركيزة: لا تلتصق الخلايا المعلّقة بطبيعتها بركيزة كما تفعل الخلايا الملتصقة. لذلك، عند إجراء اختبار تكوين المستعمرات على الخلايا المعلّقة، يجب استخدام وسط شبه صلب، مثل ميثيل السليلوز أو الآغار، لمنع الخلايا من الطفو. ويدعم هذا الوسط نمو المستعمرات في حيز ثلاثي الأبعاد، ما يتيح قياسها كميًا.
- كثافة البذر: من الضروري تحسين كثافة البذر. قد يؤدي وجود عدد أكبر من الخلايا إلى الحاجة إلى مستعمرات أكثر للتحليل. وإذا كان عدد الخلايا مفرطًا، فقد تندمج المستعمرات، مما يصعّب عدّها.
- الحضانة: بعد زرع الخلايا في وسط شبه صلب، تُحضن لمدة محددة بما يسمح بتكوّن المستعمرات. وقد تختلف مدة الحضانة وفقًا لنوع الخلايا ومعدل نموها، لكنها تتراوح عادةً من 1 إلى 3 أسابيع.
- تحديد المستعمرات وعدّها: بعد فترة الحضانة، تُحدَّد المستعمرات، وغالبًا ما تُصبغ لتسهيل رؤيتها، ثم تُعَد. وتُعرَّف المستعمرة A عادةً بأنها تجمّع من 50 خلايا أو أكثر. ويوفر عدد المستعمرات وحجمها معلومات عن قدرة الخلية على تكوين النُسَيل.
تطبيقات اختبار تكوين المستعمرات للخلايا المعلّقة:
- الحساسية للإشعاع والأدوية: يمكن لهذا الاختبار تحديد حساسية الخلايا المعلّقة (وغالبًا ما تكون خلايا مكوّنة للدم أو خلايا ابيضاض الدم) للإشعاع أو عوامل العلاج الكيميائي.
- أبحاث الخلايا الجذعية: تُعد اختبارات تكوين المستعمرات ضرورية في أبحاث الخلايا الجذعية المكوّنة للدم لتقييم قدرة خلية جذعية واحدة على تكوين مستعمرة من الخلايا المتمايزة.
- علم الأورام: في أبحاث السرطان، ولا سيما في سلالات خلايا ابيضاض الدم أو اللمفوما، تساعد اختبارات تكوين المستعمرات على تقييم قدرة الخلايا على إحداث الأورام واستجابتها للعلاجات.
التحديات المستقبلية:
- تداخل المستعمرات: في وسط شبه صلب، قد تنمو المستعمرات متقاربة أو تتداخل، مما يصعّب عدّها.
- عدم الاتساق: قد يصعب الحصول على قوام ثابت لوسط شبه صلب، مما قد يؤثر في قابلية تكرار الاختبار.
- استخلاص الخلايا: قد يكون استخلاص الخلايا من وسط شبه صلب لإجراء مزيد من التحليل أصعب من استخلاصها من وسط خلوي سائل.
خلاصة القول، مع أن اختبارات تكوين المستعمرات ترتبط تقليديًا بالخلايا الملتصقة، فإنه يمكن تكييفها للخلايا المعلّقة باستخدام أوساط شبه صلبة. ويتيح هذا التكييف للباحثين تقييم قدرة الخلايا المكوِّنة للدم وخلايا ابيضاض الدم وغيرها من أنواع الخلايا المعلّقة على تكوين المستعمرات، مما يوفر رؤى قيّمة حول بيولوجيتها واستجابتها للعلاج.
المراجع السريرية المنشورة
[1] ^ Fedr, Radek، Zuzana Pernicová، Eva Slabáková، Nicol Straková، Jan Bouchal، Michal Grepl، Alois Kozubík، وKarel Souček. 2013. اختبار آلي لاستنساخ الخلايا من أجل تحديد القدرة الاستنساخية للخلايا السرطانية والخلايا الشبيهة بالخلايا الجذعية السرطانية. قياس التدفق الخلوي. الجزء A: مجلة الجمعية الدولية لعلم الخلايا التحليلي، العدد 5 (فبراير 28). المعرّف الرقمي:10.1002/cyto.a.22273. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23450810
[2] ^ هاوزر، روس A، وآموس أورلوفسكي. 2013. العلاج بالحقن التجديدي باستخدام نضح نخاع العظم الكامل لمرض المفاصل التنكسي: سلسلة حالات. رؤى الطب السريري: التهاب المفاصل واضطرابات الجهاز العضلي الهيكلي (سبتمبر 4). doi:10.4137/CMAMD.S10951. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24046512
[3] ^ نحاس، شريف A، وروبرت ديفيز، وفرانشيسكا فايك، وكوتوكا ناكامورا، وليوتاو دو، ورفيق كيالي، وناثان تي مارتن، وباتريك كونكانون، وريتشارد A غاتي. 2011. التوصيف الشامل لخطوط الخلايا البشرية الحساسة للإشعاع باستخدام اختبارات الاستجابة لتلف DNA، يحدد اختبار المذنب المتعادل بوصفه بديلًا محتملًا للبقاء النسلي. أبحاث الإشعاع، العدد 2 (سبتمبر 30). https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21962002
